நுண்ணுயிர் & உயிர்வேதியியல் தொழில்நுட்ப இதழ்

சுருக்கம்

அராபினோஸ் ஊக்குவிப்பாளர் அடிப்படையிலான வெளிப்பாடு ஈ. கோலியில் உள்ள உயிரியல் ரீதியாக செயலில் உள்ள மறுசீரமைப்பு மனித வளர்ச்சி ஹார்மோன்: அதிகப்படியான வெளிப்பாடு மற்றும் எளிய சுத்திகரிப்பு முறைகளுக்கான உத்திகள்

சுதீர்பாபு சூரபனேனி, அஞ்சலி ஆப்தே-தேஷ்பாண்டே, கேதகி சப்னிஸ்-பிரசாத், ஜிதேந்திர குமார், வீணா ஏ ரைக்கர், பிரகாஷ் கோட்வால் மற்றும் ஸ்ரீராம் பத்மநாபன்

மறுசீரமைப்பு மனித வளர்ச்சி ஹார்மோனின் (rhGH) உற்பத்தி மற்றும் சுத்திகரிப்புக்காக E. coli இல் ஒரு அரபினோஸ் ஊக்குவிப்பாளர் அடிப்படையிலான வெளிப்பாடு அமைப்பு வடிவமைக்கப்பட்டு செயல்படுத்தப்பட்டது. குலுக்கல் குடுவை ஆய்வுகள் அசல் pBAD24 வெக்டருடன் ஒப்பிடுகையில் மாற்றியமைக்கப்பட்ட pBAD24 வெக்டரில் (pBAD24M) வெளிப்படுத்தப்பட்ட கணிசமான அளவு rhGH ஐக் குறிக்கிறது. உயிரியக்கத்தில் pBAD24 உடன் rhGH இன் அளவுகள் வெறும் 75 mg l ^{-1 ஐ} எட்டியபோது, ​​அது சோடியம் டோடெசில் சல்பேட்-பாலிஅக்ரைலமைடு ஜெல் (SD எலக்ட்ரோபோரைலமைடு ஜெல்) மூலம் தீர்க்கப்படும் புரதங்களின் அடர்த்தி அளவீடு மூலம் தீர்மானிக்கப்பட்ட அதே நிலைமைகளின் கீழ் pBAD24M திசையன் மூலம் ~1860 mg l ^{-1 ஐ} எட்டியது. PAGE). rhGH புரதமானது யூரியா டீனாட்டரேஷனுக்குப் பிறகு இரண்டு எளிய அயனி-பரிமாற்ற குரோமடோகிராஃபி படிகள் மூலம் வெற்றிகரமாகச் சுத்திகரிக்கப்பட்டது, இது ~750 mg l ^-1 சுத்திகரிக்கப்பட்ட hGH இன் ஒட்டுமொத்த மீட்டெடுப்பு 40% ஆகும். அத்தகைய சுத்திகரிக்கப்பட்ட பாக்டீரியல் பெறப்பட்ட rhGH ஆனது என்-டெர்மினல் சீக்வென்ஸ், சிடி ஸ்பெக்ட்ரா ஆய்வுகள், வெகுஜன கைரேகை பகுப்பாய்வு மற்றும் அஜிலன்ட் 2100 பயோஅனாலைசரின் பகுப்பாய்வு ஆகியவற்றால் வகைப்படுத்தப்பட்டது. சுத்திகரிக்கப்பட்ட rhGH இன் உயிர்ச் செயல்பாடு வணிக ரீதியாக கிடைக்கும் hGH (சோமாடோட்ரோபின்) உடன் ஒப்பிடத்தக்கது.