நுண்ணுயிர் & உயிர்வேதியியல் தொழில்நுட்ப இதழ்

சுருக்கம்

தலைகீழ் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் மற்றும் மல்டிஎன்சைம் ரெஸ்ட்ரிக்ஷன் ஃபிராக்மென்ட் லெங்த் பாலிமார்பிஸம் பகுப்பாய்வின் கலவை எஸ்கெரிச்சியா கோலியை விரைவாகக் கண்டறிதல்

அகிஃபுமி ஹோசோடா, அராடா கோமாபா, மிச்சிரு கிஷிமோடோ மற்றும் ஹிரோடோ தமுரா

உணவுகளில் நோய்க்கிருமி நுண்ணுயிரிகளைக் கண்காணிக்க சாகுபடி முறைகள் பயன்படுத்தப்படுகின்றன. இருப்பினும், தற்போதைய முறைகள் முடிவுகளைத் தயாரிக்க சில நாட்கள் தேவைப்படுகின்றன, மேலும் நுண்ணுயிரியல் பகுப்பாய்வின் முடிவுகள் கிடைப்பதற்கு முன்பே தயாரிப்புகள் பெரும்பாலும் விற்பனைக்கு வெளியிடப்படுகின்றன. Escherichia coli K-12 மற்றும் O157:H7 (GTC 14536) (0 CFU/g மற்றும் 1×101-104 CFU/g) ஆகியவற்றுடன் தடுப்பூசி போடப்பட்ட மாதிரி உணவு மாதிரிகளைப் பயன்படுத்தி RNA பிரித்தெடுத்தல் மற்றும் நுண்ணுயிரிகளைக் கண்டறிதல் அமைப்பை உருவாக்கினோம். ஆர்என்ஏ பிரித்தெடுப்பதற்கு முன், உயிருள்ள அல்லது இறந்த செல்கள் உணவு மாதிரிகளில் செலுத்தப்பட்டன, மாதிரிகள் ஒரே மாதிரியாக மாற்றப்பட்டன, மேலும் பிரித்தெடுக்கப்பட்ட ஆர்என்ஏக்கள் சீரற்ற 6-மெர் ஐப் பயன்படுத்தி சிடிஎன்ஏக்களை ஒருங்கிணைக்கப் பயன்படுத்தப்பட்டன. இலக்கு மரபணுக்களை பகுப்பாய்வு செய்ய PCR பயன்படுத்தப்பட்டது, மேலும் PCR தயாரிப்புகள் இரண்டு கட்டுப்பாடு என்சைம்களுடன் (HhaI மற்றும் HaeIII) செரிக்கப்பட்டது, கட்டுப்பாட்டு துண்டு நீள பாலிமார்பிஸத்தை (RFLP) பகுப்பாய்வு செய்ய. PCR ஆனது 1×101 CFU/g வரை உயிரணுக்களின் RNA பிரித்தெடுத்தல் மற்றும் cDNA தொகுப்புகளை உறுதிப்படுத்தியது. Multienzyme RFLP (MeRFLP) பெறப்பட்ட டிஎன்ஏ துண்டுகளின் அளவுகள் கோட்பாட்டு துண்டு அளவுகளுடன் ஒத்துப்போவதைக் காட்டியது, ரிவர்ஸ் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன்-MeRFLP (RT-MeRFLP) இலக்கு பாக்டீரியாவை அடையாளம் காண முடியும் என்று பரிந்துரைக்கிறது. இந்த முடிவுகள் RT-MeRFLP, கலாச்சாரம் தேவையில்லை மற்றும் 6.5 மணி நேரத்திற்குள் முடிக்க முடியும், உணவில் உள்ள பாக்டீரியாவை அடையாளம் காண குறைந்த விலை, விரைவான மற்றும் நம்பகமான அமைப்பிற்கான ஒரு நம்பிக்கைக்குரிய அணுகுமுறையாகும்.