நுண்ணுயிர் & உயிர்வேதியியல் தொழில்நுட்ப இதழ்

சுருக்கம்

டிஎன்ஏ ஸ்பைரல் சூப்பர்கோயிலிங் மற்றும் இன்ட்ராமாலிகுலர் டோபாலஜிகல் இன்டர்லிங்க்

Xitai Huang, Jia Yu, Zhenfeng Zhang மற்றும் Kou Cao

Escherichia coli குரோமோசோம் டிஎன்ஏ ஆர்க்கிமிடியன் சுருள் போன்ற சூப்பர் சுருள்களின் துணைக்குழுக்களைக் கொண்டதாக முன்பு காணப்பட்டது. இத்தகைய டிஎன்ஏ கட்டமைப்பை செல்கள் எவ்வாறு உருவாக்குகின்றன என்பது தெரியவில்லை. தற்போதைய ஆய்வில், அணுசக்தி நுண்ணோக்கி (AFM) படங்கள், 0.5 μg/ml எத்திடியம் ப்ரோமைடு (EB) உடன் இணைக்கும்போது சூப்பர் சுருள் செய்யப்பட்ட pBR322 DNA ஒரு சுழல் அமைப்பை உருவாக்குகிறது, இது பூஜ்ஜிய சூப்பர்ஹெலிகல் அடர்த்தியாகக் கருதப்படுகிறது. ஒரு புதுமையான இடவியல் பிணைப்பு, இன்ட்ராமாலிகுலர் டோபோலாஜிக்கல் இன்டர்லிங்க் (ITL), டிஎன்ஏ சுழல் உருவாக்கத்தை ஊக்குவிக்கிறது என்று புதிய சான்றுகள் தெரிவிக்கின்றன. இடைக்கணிப்பு இல்லாமல், சூப்பர்கோயில் செய்யப்பட்ட pBR322 டிஎன்ஏ, சூப்பர்கோயில் அடர்த்தியின் சீரற்ற விநியோகத்துடன் பிளெக்டோனெமிகல் சூப்பர்கோயிலைக் காட்டுகிறது. டிஎன்ஏவை EB (20 μg/ml) மூலம் இணைக்கப்பட்டபோதும் இதே போன்ற கவனிப்பு செய்யப்பட்டது. ஹெலிகல் இரட்டை இழைகளை முறுக்குவதைத் தடுப்பதற்கும் வட்ட டிஎன்ஏவை வெவ்வேறு சூப்பர்ஹெலிகல் அடர்த்தி களங்களில் ஒப்பிடுவதற்கும் ITL ஒரு பிரேக்காக செயல்படுகிறது என்று முடிவுகள் சுட்டிக்காட்டின. டிஎன்ஏ அல்கலைனில் நீக்கப்பட்டபோது, ​​ஏஎஃப்எம் படங்கள் ஐடிஎல் நிலையானதாக இருப்பதைக் காட்டியது. குறைக்கப்பட்ட pBR322 டிஎன்ஏ கட்டுப்பாடு எண்டோநியூக்லீஸ் பிஎஸ்டிஐ மூலம் வெட்டப்பட்டதால், செரிக்கப்பட்ட டிஎன்ஏ இரண்டு இலவச வெட்டு முனைகள் கொண்ட ஒரு மையமாக ஒன்றிணைவதற்கு உள்மூல இணைப்புகளை வைத்திருந்தது. இயற்கையான pBR322 DNA, HindIII மற்றும் தளம் சார்ந்த நிக்கேஸ் Nb உடன் செரிக்கப்படும்போது ஒன்றோடொன்று இணைக்கப்பட்ட இடைநிலைகளைக் காணலாம். Bpu10I. அனைத்து ஆதாரங்களும் ITL pBR322 DNA இல் உள்ளது மற்றும் DNA சுழல் சூப்பர் சுருள் ஏற்படுத்துகிறது. வெவ்வேறு ஐடிஎல் எண்ணைக் கொண்ட டிஎன்ஏ டோபோயிசோமர்கள் எலக்ட்ரோபோரேசிஸில் பட்டைகளின் ஏணியில் இயங்குவது கண்டறியப்பட்டது, இது ஈ.கோலி கைரேஸால் உற்பத்தி செய்யப்படும் டிஎன்ஏ டோபாய்சோமர்களில் இருந்து வேறுபட்டது. E. coli செல் சாற்றைக் கொண்ட செல் ஃப்ரீ அமைப்பில், தளர்வான cccDNA அடி மூலக்கூறிலிருந்து ITL DNA டோபாய்சோமர்களை உற்பத்தி செய்வதற்கு டோபோயிசோமரேஸ் IV தேவை என்பதை நிரூபிக்கிறோம். ஒட்டுமொத்தமாக, டிஎன்ஏ இடவியல் கட்டமைப்பின் புதுமையான உறுப்பை ITL பிரதிபலிக்கிறது என்று எங்கள் தரவு தெரிவிக்கிறது. டிஎன்ஏ சுழல் சூப்பர்கோயிலிங் என்பது கலத்தில் இருக்கும் ஒரு உலகளாவிய அமைப்பாக இருக்கலாம்.