ஸ்டெம் செல் ஆராய்ச்சி மற்றும் சிகிச்சை இதழ்

சுருக்கம்

கரு ஸ்டெம் செல் வேறுபாட்டில் ஈடுபட்டுள்ள மரபணுக்களை அடையாளம் காண LINE-1 அடிப்படையிலான செருகும் பிறழ்வுத் திரைகள்

சங்-ஹன் லீ மற்றும் டேனி ரங்கசாமி

பின்னணி: கரு ஸ்டெம் செல்களின் உள்ளார்ந்த பண்புகள் பற்றிய அறிவு , சிகிச்சை நோக்கங்களுக்காக இந்த செல்களைப் பயன்படுத்துவதற்கான சாத்தியம் நடைமுறைக்கு வருவதற்கு முன்பு அவசியம். ஒரு குறிப்பிட்ட பினோடைப்பை வழங்க போதுமான மரபணுக்களை அடையாளம் காண செருகும் பிறழ்வுத் திரைகள் பரவலாகப் பயன்படுத்தப்படுகின்றன; இருப்பினும், அத்தகைய அணுகுமுறைகளின் பயன்பாடுகள் மவுஸ் மாதிரிகள் மட்டுமே. எனவே, ஸ்டெம் செல்களில் மரபணு கண்டுபிடிப்பு அணுகுமுறைகளை அனுமதிக்கும் புதிய டிஎன்ஏ டிரான்ஸ்போசன் அமைப்பை உருவாக்க வேண்டிய அவசியம் உள்ளது.
முறைகள்: மவுஸ் கரு ஸ்டெம் செல்களைப் பராமரிப்பதிலும் வேறுபடுத்துவதிலும் ஈடுபட்டுள்ள மரபணுக்களை அடையாளம் காண, நீண்ட இடைவெளியில் உள்ள அணு உறுப்பு 1 (LINE -1) ரெட்ரோட்ரான்ஸ்போசனைப் மரபணுப் பொறி வெக்டராகப் பயன்படுத்துவதற்கான சாத்தியக்கூறுகளை ஆராய இந்த ஆய்வு மேற்கொள்ளப்பட்டது.
முடிவுகள்: எங்கள் வெக்டரின் முதுகெலும்பில் உள்ள சாரக்கட்டு/மேட்ரிக்ஸ் இணைப்புப் பகுதிகளைப் பயன்படுத்தி எபிசோமல், வைரஸ் அல்லாத LINE-1 ரெட்ரோட்ரான்ஸ்போசன் அமைப்பை உருவாக்கினோம். இந்த மரபணு பொறி திசையன் ஒரு GFP மார்க்கரைக் கொண்டுள்ளது, அதன் வெளிப்பாடு வெற்றிகரமான செருகும் மாற்றத்திற்குப் பிறகு மட்டுமே நிகழ்கிறது. இந்த திசையனைப் பயன்படுத்துவதன் மூலம், GFP வெளிப்பாட்டுடன் இணைந்து, இரண்டு அறியப்பட்ட மரபணுக்கள் உட்பட, சிதைந்த மரபணுக்களைக் காண்பிக்கும் நான்கு தனிப்பட்ட கரு ஸ்டெம் செல் குளோன்களை வெற்றிகரமாக தனிமைப்படுத்தியுள்ளோம். தலைகீழ் PCR அணுகுமுறையைப் பயன்படுத்தி இந்த மரபணுக்களின் அடையாளத்தை நாங்கள் உறுதிசெய்தோம் மற்றும் shRNAகள் மற்றும் கரு ஸ்டெம் செல்களின் வேறுபடுத்தப்படாத குறிப்பான்களைப் பயன்படுத்தி செல் வேறுபாட்டில் அவற்றின் செயல்பாட்டைச் சரிபார்த்தோம் .
முடிவுகள்: இந்த செருகும் பிறழ்வைப் பயன்படுத்துவதற்கான எளிமை மற்றும் GFP வெளிப்பாடு மூலம் சீர்குலைந்த மரபணுக்களைக் கொண்ட செல்களை அடையாளம் காணும் எளிமை ஆகியவை இந்த LINE-1 வெக்டரை கரு ஸ்டெம் செல் மற்றும் புற்றுநோய் ஸ்டெம் செல் மரபணு கண்டுபிடிப்புக்கான ஒரு நம்பிக்கைக்குரிய கருவியாக ஆக்குகின்றன.