ஜர்னல் ஆஃப் கார்சினோஜெனிசிஸ் & மியூட்டாஜெனெசிஸ்

சுருக்கம்

டிஎன்ஏ ஸ்ட்ராண்ட் பிரேக் அசோசியேட்டட் பைஸ்டாண்டர் எஃபெக்ட் (டிஎஸ்பி-ஏபிஇ) அளவைக் கண்டறிய E18 செல் மாதிரியின் பயன்பாடு

ஜலால் நசீர்

லிம்போபிளாஸ்ட் செல் லைன் E18 என்பது TK6 இன் வழித்தோன்றலாகும் மற்றும் ஹீட்டோரோசைகஸ் TK1 / tk1 மரபணுவின் இன்ட்ரான் 2 இல் I-Sce1 செருகலைக் கொண்டுள்ளது . கதிர்வீச்சு சார்பற்ற DNA சேதம் மற்றும் அதனுடன் தொடர்புடைய பார்வையாளர் விளைவை அளவிட I-Sce1 தளத்தில் இரட்டை இழை இடைவெளிகளைத் தூண்டுவதற்கு E18 ஐ I-Sce1 கட்டுப்பாடு எண்டோநியூக்லீஸுடன் இலக்காகக் கொள்ளலாம். E18 செல் கோட்டின் கட்டுமானத்திற்காக ஒரு Eco47III தளம் pTK-UAS நேர்கோட்டு பிளாஸ்மிட் முதுகெலும்பில் செருகப்பட்டது மற்றும் டிஎன்ஏ லிகேஸ் முன்னிலையில் ISce1 கட்டுப்பாட்டு வரிசையின் மழுங்கிய-முடிவு ஒலிகோநியூக்ளியோடைடுகளுடன் இணைக்கப்பட்டது. DH5-α செல்கள் pTK-UAS-Eco47III-Sce1 மற்றும் ஆம்பிசிலின் எதிர்ப்பு காலனிகளைத் தேர்ந்தெடுப்பதன் மூலம் செல்களை வெப்பமாக்குவதன் மூலம் மாற்றப்பட்டன. Eco47III மற்றும் I-Sce1 தளங்கள் இருப்பதற்காக பிளாஸ்மிட் டிஎன்ஏ பிரித்தெடுக்கப்பட்டு பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்டது. தைமிடின் கைனேஸ் செயலில் உள்ள அலீலின் இன்ட்ரான் 2 இல் உள்ள I-Sce தளத்துடன் கூடிய குளோன் மேலும் பரிசோதனைக்காகத் தேர்ந்தெடுக்கப்பட்டு அதற்கு E18 என்று பெயரிடப்பட்டது. இரட்டை இழை முறிவு தூண்டப்பட்ட பிறழ்வுகளை நிரூபிக்க இந்த மாதிரி சோதிக்கப்பட்டது, மேலும் இந்த இழை முறிவுகள் டிஎன்ஏ ஸ்ட்ராண்ட் பிரேக் தொடர்புடைய பார்வையாளர் விளைவை (DSB-ABE) நேவ் செல்களில் அதிகரித்த பிறழ்வு அதிர்வெண் மூலம் அளவிடலாம். GFP மார்க்கரைச் சுமந்து செல்லும் பிளாஸ்மிட் pAdTrackCMV I-Sce1 ஆனது I-Sce1 கட்டுப்பாடு எண்டோநியூக்லீஸை வெளிப்படுத்த E18 கலங்களில் எலக்ட்ரோபோரேட் செய்யப்பட்டது, இது செயலில் உள்ள TK அலீலின் இன்ட்ரான் 2 இல் I-Sce1 தளத்தை குறிவைக்கிறது. pAdTrackCMV I-Sce1 வழியாக வெளிப்புற I-Sce1 வெளிப்பாட்டைக் கொண்டு E18 ஐ இலக்காகக் கொண்ட ஒரு இறுதிப் புள்ளியாக பார்வையாளர் பிறழ்வு பின்னத்தை (BMF) அளவிடுவதற்கு நேரடி பிறழ்வு பின்னத்தை (DMF) அல்லது நிபந்தனைக்குட்பட்ட நடுத்தர பரிமாற்றத்தை அளவிடுவதற்கு பிறழ்வு பின்னம் மதிப்பீடு பயன்படுத்தப்பட்டது. டிஎன்ஏ சேதத்தைத் தூண்டுவதற்கும், டிஎம்எஃப் மற்றும் பிஎம்எஃப் அளவைக் கணக்கிடுவதற்கும்.