தாவர நோயியல் & நுண்ணுயிரியல் இதழ்

சுருக்கம்

PCR அடிப்படையிலான பன்முகத்தன்மை ஆய்வுகளுக்கு S. Rolfsii DNA பிரித்தெடுப்பதற்கான எளிய மற்றும் திறமையான முறை

ஆண் AS, Kato F மற்றும் Mukankusi CM

Sclerotium rolfsii இலிருந்து டிஎன்ஏவைப் பிரித்தெடுக்கும் தற்போதைய முறைகள் உயர்தர டிஎன்ஏவைப் பிரித்தெடுக்க அதிக அபாயகரமான கரிம இரசாயனங்களைப் பயன்படுத்துகின்றன. டிஎன்ஏவை பிரித்தெடுப்பது எக்ஸோபோலிசாக்கரைடுகளால் மேலும் சிக்கலானது, அவை டிஎன்ஏவுடன் பிணைக்கப்படுகின்றன, அவை சளியை உருவாக்குகின்றன. S. rolfsii இலிருந்து DNA உயர் தரத்தைப் பிரித்தெடுப்பதற்கான எளிய மற்றும் திறமையான நெறிமுறையை நாங்கள் உருவாக்கினோம். எங்கள் முறையானது புரதங்களை செயலிழக்கச் செய்ய சோடியம் டோடெசில் சல்பேட் மற்றும் புரோட்டினேஸ் K ஆகியவற்றைக் கொண்ட டிஎன்ஏ பிரித்தெடுக்கும் இடையகத்தைப் பயன்படுத்துகிறது மற்றும் எக்ஸோபோலிசாக்கரைடுகளைத் துரிதப்படுத்த அதிக உப்பு செறிவு உள்ளது. டிஎன்ஏ பிரித்தெடுக்கும் செயல்பாட்டின் போது இது ஃபீனால், குளோரோஃபார்ம் அல்லது ஐசோஅமைல் ஆல்கஹால் ஆகியவற்றைப் பயன்படுத்துவதில்லை. மைசீலியாவை உறைந்த நிலையில் உலர்த்துதல் மற்றும் திரவ நைட்ரஜனைப் பயன்படுத்தி அரைக்க வேண்டிய அவசியமில்லை. எங்கள் முறையைப் பயன்படுத்தி, 100 மில்லிகிராம் மைசீலியாவிலிருந்து போதுமான அளவு தூய்மையான (சராசரி A260: A280=1.91 ± 0.001) DNA (சராசரி = 55.57 ± 0.002 ng/µl) பெறப்பட்டது. டிஎன்ஏ ஆனது பிசிஆர் பெருக்கத்திற்கு இண்டர்-சிம்பிள் சீக்வென்ஸ் ரிபீட் ப்ரைமர்கள் மற்றும் ப்ரைமர்களைப் பயன்படுத்தி எஸ். ரோல்ஃப்சியின் உள் டிரான்ஸ்கிரிப்ட் ஸ்பேசர் பகுதியை இலக்காகக் கொண்டது. திரவ நைட்ரஜன் மற்றும் உறைந்த உலர்த்தும் வசதிகள் இல்லாத ஆய்வகங்களில் எங்கள் முறை மிகவும் பயனுள்ளதாக இருக்கும் மற்றும் பொதுவான பீனின் இந்த முக்கியமான நோய்க்கிருமியின் PCR அடிப்படையிலான பைலோஜெனடிக் ஆய்வுகளுக்கு ஒரு ஊக்கியாக இருக்கும்.