உயிரியல் மற்றும் மருத்துவம்

சுருக்கம்

லிபோபோலிசாக்கரைடு (எல்பிஎஸ்) மற்றும் புரோட்டீன்-எல்பிஎஸ் வளாகங்கள்: ஜெல் எலக்ட்ரோபோரேசிஸ், மாஸ் ஸ்பெக்ட்ரோமெட்ரி மற்றும் பயோசேஸ் மூலம் கண்டறிதல் மற்றும் குணாதிசயம்

யூஜெனியோ ஹார்டி, கரிடாட் ரோட்ரிக்ஸ் மற்றும் லூயிஸ் ஈ. ட்ருஜிலோ

குறிப்பிட்ட ஏற்பிகளுடனான லிப்போபோலிசாக்கரைடு (LPS) தொடர்புகளின் கண்டுபிடிப்பு மற்றும் குணாதிசயத்திற்கு ஒரு முன்நிபந்தனை மற்றும் அதன் விளைவாக ஏற்படும் நோயியல் இயற்பியல் விளைவுகள் LPS இனங்களின் விரிவான கட்டமைப்பு பகுப்பாய்வு ஆகும். இந்த சுருக்கமான மதிப்பாய்வு, எல்பிஎஸ்களைக் கண்டறிவதற்கும் வகைப்படுத்துவதற்கும் மற்ற உயிர்வேதியியல் தொழில்நுட்பங்களுடன் இணைக்கப்பட்ட ஜெல் எலக்ட்ரோபோரேசிஸின் பயன்பாட்டைச் சுருக்கமாகக் கூறுவதை நோக்கமாகக் கொண்டுள்ளது. லிபோபோலிசாக்கரைடு தனித்தனியாக அல்லது LPSகள் மற்றும் புரதங்கள்/பெப்டைடுகள் கொண்ட கலவைகளை சொந்த அகரோஸ் ஜெல் எலக்ட்ரோபோரேசிஸ் (NAGE) மூலம் பிரிக்கலாம், அதன் பிறகு இமிடாசோல் மற்றும் துத்தநாக உப்புகளுடன் LPSகள் கண்டறியப்படுகின்றன. Coomassie புத்திசாலித்தனமான நீல R-250 உடன் இரட்டைக் கறை படிதல் செயல்முறையானது புரதம்-LPS தொடர்புகளைக் கண்டறிந்து ஆய்வு செய்வதற்கு NAGE ஐப் பயன்படுத்துகிறது. கலவை பகுப்பாய்விற்கு, எல்பிஎஸ் திரட்டுகள் உயர் தெளிவுத்திறனுடன், சர்பாக்டான்ட்-பாலிஅக்ரிலாமைடு ஜெல் எலக்ட்ரோபோரேசிஸ் மூலம் பிரிக்கப்படுகின்றன. துத்தநாகம்-இமிடாசோல் மற்றும் ஜெல் நுண் துகள்களிலிருந்து எலுஷன் மூலம் தலைகீழ் கறை படிந்த பிறகு, கிளைகோஃபார்ம்-குறிப்பிட்ட LPSகள் கட்டமைப்பு மற்றும் உயிரியல் பகுப்பாய்விற்கு தயாராக உள்ளன. ஒலிகோசாக்கரைடுகளின் டேன்டெம் எலக்ட்ரோஸ்ப்ரே அயனியாக்கம் மாஸ் ஸ்பெக்ட்ரோமெட்ரி (ESI-MS/MS) அடிப்படையிலான வரிசைப் பகுப்பாய்விற்கு, LPSகள் லேசான அமில நீராற்பகுப்பு, டிஃபோஸ்ஃபோரிலேஷன் மற்றும் பெர்மெதிலேஷன் ஆகியவற்றுக்கு உட்படுத்தப்படுகின்றன. மேலும், O-deacylated LPS படிவங்களை மேட்ரிக்ஸ்-உதவி லேசர் டிசார்ப்ஷன்/அயனியாக்கம்-நேரம் விமானம்-MS மூலம் பகுப்பாய்வு செய்யலாம். சுத்திகரிக்கப்படாத LPSகளின் நிறமாலையுடன் ஒப்பிடுவதன் மூலம், நுண்ணிய சுத்திகரிக்கப்பட்ட LPSகளின் நிறை நிறமாலையானது பன்முகத்தன்மையைக் குறைத்து, சமிக்ஞை-க்கு-இரைச்சல் விகிதங்களை அதிகரிப்பதைக் காட்டுகிறது. மேலும், MS க்கு முந்தைய LPSகளின் நுண்ணுயிர் சுத்திகரிப்பு, குறைந்த அளவு LPS கிளைகோஃபார்ம்களைக் கண்டறிவதற்கான அதிக உணர்திறனை அனுமதிக்கிறது. நுண்ணிய சுத்திகரிக்கப்பட்ட LPS பின்னங்கள் சுய-அசெம்பிள் நானோ திரட்டுகளை உருவாக்க பயன்படுத்தப்படலாம், அவை மாறும் ஒளி சிதறல் மூலம் கண்டறியப்படலாம். லேசர் டாப்ளர் எலக்ட்ரோபோரேசிஸ் அடிப்படையிலான அளவீடுகள் மூலம் LPS திரட்டுகளின் Z-சாத்தியத்தில் O-பக்க சங்கிலி நீளத்தின் விளைவை மதிப்பிடலாம். இவ்வாறு பெறப்பட்ட கிளைகோஃபார்ம்-குறிப்பிட்ட LPSகள் இரசாயன ரீதியாக மட்டுமல்லாமல் உயிரியல் ரீதியாகவும் செயல்படுகின்றன, எ.கா. லிமுலஸ் அமீபோசைட் லைசேட் சோதனை, TNF-α மதிப்பீடு மற்றும் மனித டோல் போன்ற ஏற்பி 4 இல் அகோனிஸ்டிக் விளைவு.