மரபணு தொழில்நுட்பம்

சுருக்கம்

5ʹ மொழிபெயர்க்கப்படாத மற்றும் மொழிபெயர்க்கப்பட்ட பகுதியை மாற்றுவதன் மூலம் ஈ. கோலியில் மறுசீரமைப்பு மனித ப்ரோயின்சுலின் வெளிப்பாடு

அஸ்லம் எஃப், லத்தீஃப் கே, வசீம் ஆர், நாஸ் எஸ் மற்றும் இப்திகார் எஸ்

ஆர்என்ஏவை மாற்றுவதற்கு டிஎன்ஏ குறியீட்டை மாற்றுவதன் மூலம், மெசஞ்சர் ஆர்என்ஏ மொழிபெயர்ப்பின் செயல்முறையைத் தொடங்குகிறது. ஷைன்-டல்கார்னோ சீக்வென்ஸ் எனப்படும் பாலி ப்யூரின் நிறைந்த வரிசை தொடக்கக் கோடனின் நிலையைத் தீர்மானிக்க உதவுகிறது, ஷைன்-டல்கார்னோ வரிசை வேறுபட்டது, ஏனெனில் இது ரைபோசோமை இந்த வரிசையில் நேரடியாக பிணைப்பதன் மூலம் எம்ஆர்என்ஏவின் உள் நிலையில் உருவாக்க அனுமதிக்கிறது. ரைபோசோமால் பிணைப்பு தளம் மொழிபெயர்ப்பு துவக்க தளத்தின் 5'இறுதியில் mRNA இரண்டாம் கட்டமைப்பை பிணைக்க பயன்படுகிறது, RBS இடையே உள்ள தூரம் மற்றும் ஒரு மரபணுவின் கோடான் விளைவுகளை துவக்குகிறது. இந்த ஆய்வில், ரைபோசோம் பிணைப்பு தளத்திற்கு இடையே உள்ள தூரத்தை மாற்றி, மொழிபெயர்ப்பு வெளிப்பாட்டின் வெவ்வேறு விகிதங்களைப் பெற கோடானைத் தொடங்குகிறோம். இந்த நோக்கத்திற்காக, pET21a வெக்டரில் குளோன் செய்யப்பட்ட புரோன்சுலின் மரபணு, பிணைப்பு தளத்திற்கும் தொடக்க கோடானுக்கும் இடையிலான தூரம் 8 நியூக்ளியோடைடுகளாக தக்கவைக்கப்பட்டுள்ளது. ரைபோசோம் பிணைப்பு தளம் (RBS) மற்றும் தொடக்க கோடான் ஆகியவற்றுக்கு இடையேயான இந்த தூரத்தில், ப்ரோயின்சுலின் வெளிப்பாடு மொத்த செல்லுலார் புரதங்களில் 30% ஆகும். இடையில் 10 நியூக்ளியோடைடுகள் இருக்கும்போது, ​​வெளிப்பாடு 2-4% வரை குறைகிறது. RBS மற்றும் ஸ்டார்ட் கோடான் இடையே 12 நியூக்ளியோடைடுகள் இருப்பதால், வெளிப்பாடு மேலும் 1-2% வரை குறைந்தது. இந்த முயற்சிகள் தற்செயலாக செய்யப்படுவதால், எம்ஆர்என்ஏ இரண்டாம் நிலை கட்டமைப்புகளை எம்-மடிப்பு மூலம் சரிபார்ப்பதன் மூலம் ரைபோசோம் பிணைப்பு தளத்திற்கும் புரோஇன்சுலின் மரபணுவின் தொடக்கத்திற்கும் இடையே ஒரு பிணைப்பைக் காட்டியது. ப்ரோஇன்சுலின் மரபணுவின் தொடக்கத்தில் பத்து வெவ்வேறு நியூக்ளியோடைடுகளை இணைத்து, எம்ஆர்என்ஏவின் இரண்டாம் கட்டமைப்பை குறைவான நிலையானதாக மாற்றுவதன் மூலம் மற்றொரு முயற்சி மேற்கொள்ளப்பட்டது (ΔG=-5.5) BL21 கோடான் பிளஸ் செல்களில் ப்ரோஇன்சுலின் வெளிப்பாட்டை கணிசமாக மாற்றாது. புரத வெளிப்பாட்டின் பிற கட்டுப்படுத்தும் காரணிகள் உள்ளன, அதாவது, வளர்சிதை மாற்ற உறுதியற்ற தன்மை, mRNA இன் விரைவான சிதைவு அல்லது புரதத்தின் குவிப்பு ஆகியவை mRNA இன் வெளிப்பாட்டைக் குறைக்கலாம்.