உயிர் வேதியியல் & பகுப்பாய்வு உயிர்வேதியியல்

சுருக்கம்

மைட்டோகாண்ட்ரியாவில் ROS உற்பத்தியில் கால்சியத்தின் விளைவுகளைக் கண்காணிப்பதற்கான ஆய்வாக Dichlorofluorescein ஐப் பயன்படுத்துதல்

ஓல்கா வி அகோபோவா, லியுட்மிலா கோல்ச்சின்ஸ்காயா மற்றும் வாலண்டினா நோசர்

உயிரணுக்கள் மற்றும் தனிமைப்படுத்தப்பட்ட மைட்டோகாண்ட்ரியாவில் வினைத்திறன் ஆக்ஸிஜன் இனங்கள் (ROS) உற்பத்தியைக் கண்காணிக்க Dichlorofluorescein (DCF) பரவலாகப் பயன்படுத்தப்படுகிறது. தனிமைப்படுத்தப்பட்ட மைட்டோகாண்ட்ரியாவில் Ca2+ போக்குவரத்துடன் இணைந்து ROS உருவாக்கத்தைக் கண்காணிப்பதற்கு DCF இன் பயன்பாட்டிற்கான வெவ்வேறு அணுகுமுறைகளை ஒப்பிடுவதே எங்கள் நோக்கம். ROS உற்பத்தியில் Ca2+ விளைவுகள் DCF பயன்பாட்டின் இரண்டு முறைகளைப் பயன்படுத்தி எலி மூளை மற்றும் கல்லீரல் மைட்டோகாண்ட்ரியாவில் ஆய்வு செய்யப்பட்டது: முதலாவது DCF முன்னோடியான dichlorofluorescein diacetate (DCFDA) உடன் ஸ்டாக் மைட்டோகாண்ட்ரியல் சஸ்பென்ஷனை முன்கூட்டியே ஏற்றுவது, மற்றொன்று DCFDA இன் அலிகோட்களை நேரடியாகச் சேர்ப்பது. அடைகாக்கும் ஊடகம். கால்சியம் மூளை மற்றும் கல்லீரல் மைட்டோகாண்ட்ரியாவில் ROS உற்பத்தியை அதிகரித்தது, சைட்டோக்ரோம் c இன் படிப்படியான வெளியீடு மற்றும் எலக்ட்ரான் ஓட்டத்தின் நுழைவு ஆகியவற்றால் ஏற்படும் நிலையான மற்றும் சமநிலையற்ற நிலைகளில். DCF-முன் ஏற்றப்பட்ட மைட்டோகாண்ட்ரியாவைப் பயன்படுத்தி, நிலையான நிலையின் கீழ் ROS உருவாவதற்கான விகிதம் Ca2+-சைக்கிளிங் மற்றும் Ca2+-தூண்டப்பட்ட சுவாசத்தின் விகிதத்தைப் பொறுத்து நேர்கோட்டில் இருப்பதைக் காட்டியுள்ளோம். சமநிலையற்ற நிலைக்கு மாறுவது ROS உருவாக்கத்தில் நேரியல் அல்லாத உயர்வுக்கு வழிவகுத்தது, இது Ca2+ செறிவைச் சார்ந்திருப்பதையும் வெளிப்படுத்தியது. DCF-முன் ஏற்றப்பட்ட மைட்டோகாண்ட்ரியாவில் DCF ஃப்ளோரசன்ஸானது Ca2+ போக்குவரத்தின் நேரப் போக்கை நெருக்கமாகப் பின்பற்றியது, இறக்கப்படாத மைட்டோகாண்ட்ரியா ஆய்வு ஏற்றுதல் ROS உருவாக்கத்தைக் கண்டறிவதில் குறுக்கிடுகிறது, ஏனெனில் DCF செறிவு மேட்ரிக்ஸ் இடத்தில் தொடர்ந்து மாறுகிறது. சோதனைகளின் அடிப்படையில், மைட்டோகாண்ட்ரியாவில் ஏற்றப்பட்ட DCF ஆனது ROS உற்பத்தியில் Ca2+ போக்குவரத்தின் விளைவுகளைக் கண்காணிக்க பொருத்தமான ஆய்வுக்கு உதவும் என்ற முடிவுக்கு வந்தோம்.